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應(yīng)用案例

常壓室溫等離子誘變選育L?色氨酸高產(chǎn)菌株

來源:   作者: 發(fā)布日期:2022-03-01 訪問量:2959

本期為您推薦江蘇澳創(chuàng)生物科技有限公司王健教授研究團隊發(fā)表在知名期刊《食品與發(fā)酵工業(yè)》上的一篇文章:常壓室溫等離子誘變選育L?色氨酸高產(chǎn)菌株。

文章摘要內(nèi)容如下:

?色氨酸是人和動物體內(nèi)的一種必需氨基酸,是構(gòu)成蛋白的重要組成部分,但人和動物自身不能合成L?色氨酸,必須從外界攝取。目前L-色氨酸的生產(chǎn)方法以微生物發(fā)酵法為主,相比傳統(tǒng)的化學(xué)合成法和蛋白質(zhì)水解法,微生物發(fā)酵法具有更低的生產(chǎn)成本、更加綠色環(huán)保、更易于大規(guī)模生產(chǎn)等顯著的優(yōu)越性。微生物發(fā)酵法生產(chǎn)L-色氨酸的過程中,微生物菌種的優(yōu)劣決定著發(fā)酵生產(chǎn)過程中的生產(chǎn)工藝、生產(chǎn)成本甚至產(chǎn)品質(zhì)量,因此,選育高產(chǎn)色氨酸優(yōu)良菌株具有重要意義。常壓室溫等離子體(atmospheric and room temperature plas-ma,ARTP)誘變技術(shù)最近幾年在科研及工業(yè)領(lǐng)域逐步得到應(yīng)用,尤其在微生物突變育種中取得了良好的效果。與其他誘變育種技術(shù)相比,ARTP 誘變育種技術(shù)能夠更有效造成 DNA 的突變,并且設(shè)備操作簡單快捷,對環(huán)境條件要求較低,操作過程中安全性較高,在高效進化育種領(lǐng)域具有較大的應(yīng)用潛力。

本研究中,為了提升發(fā)酵法產(chǎn)L-色氨酸的生產(chǎn)效率,使用常壓室溫等離子誘變育種技術(shù),并結(jié)合結(jié)構(gòu)類似物抗性定向篩選的方法,選育高產(chǎn)色氨酸菌株。將出發(fā)菌 Escherichia coli AC-1042 經(jīng)過ARTP誘變處理后,在抗性培養(yǎng)基平板上篩選具有5-甲基色氨酸、對氟苯丙氨酸抗性的突變菌株,選取產(chǎn)酸高、遺傳穩(wěn)定的菌株重復(fù)進行ARTP誘變處理和抗性篩選,不斷提高菌株對結(jié)構(gòu)類似物的抗性水平。經(jīng)過多次ARTP誘變處理和抗性篩選,獲得1株色氨酸高產(chǎn)菌株ACTRP104,經(jīng)過30L發(fā)酵罐培養(yǎng)44h后L-色氨酸質(zhì)量濃度可以達到61.65g/L,葡萄糖轉(zhuǎn)化率達到20.64%,比出發(fā)菌分別提高了20.69%和17.81%。結(jié)果表明,ARTP誘變和結(jié)構(gòu)類似物抗性篩選相結(jié)合,可以有效地獲得色氨酸高產(chǎn)突變菌株,大大提高色氨酸的發(fā)酵生產(chǎn)技術(shù)水平,獲得的色氨酸高產(chǎn)菌株ACTRP104具有較好的工業(yè)化應(yīng)用前景。

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文章摘要內(nèi)容如下:

?色氨酸是人和動物體內(nèi)的一種必需氨基酸,是構(gòu)成蛋白的重要組成部分,但人和動物自身不能合成L?色氨酸,必須從外界攝取。目前L-色氨酸的生產(chǎn)方法以微生物發(fā)酵法為主,相比傳統(tǒng)的化學(xué)合成法和蛋白質(zhì)水解法,微生物發(fā)酵法具有更低的生產(chǎn)成本、更加綠色環(huán)保、更易于大規(guī)模生產(chǎn)等顯著的優(yōu)越性。微生物發(fā)酵法生產(chǎn)L-色氨酸的過程中,微生物菌種的優(yōu)劣決定著發(fā)酵生產(chǎn)過程中的生產(chǎn)工藝、生產(chǎn)成本甚至產(chǎn)品質(zhì)量,因此,選育高產(chǎn)色氨酸優(yōu)良菌株具有重要意義。常壓室溫等離子體(atmospheric and room temperature plas-ma,ARTP)誘變技術(shù)最近幾年在科研及工業(yè)領(lǐng)域逐步得到應(yīng)用,尤其在微生物突變育種中取得了良好的效果。與其他誘變育種技術(shù)相比,ARTP 誘變育種技術(shù)能夠更有效造成 DNA 的突變,并且設(shè)備操作簡單快捷,對環(huán)境條件要求較低,操作過程中安全性較高,在高效進化育種領(lǐng)域具有較大的應(yīng)用潛力。

本研究中,為了提升發(fā)酵法產(chǎn)L-色氨酸的生產(chǎn)效率,使用常壓室溫等離子誘變育種技術(shù),并結(jié)合結(jié)構(gòu)類似物抗性定向篩選的方法,選育高產(chǎn)色氨酸菌株。將出發(fā)菌 Escherichia coli AC-1042 經(jīng)過ARTP誘變處理后,在抗性培養(yǎng)基平板上篩選具有5-甲基色氨酸、對氟苯丙氨酸抗性的突變菌株,選取產(chǎn)酸高、遺傳穩(wěn)定的菌株重復(fù)進行ARTP誘變處理和抗性篩選,不斷提高菌株對結(jié)構(gòu)類似物的抗性水平。經(jīng)過多次ARTP誘變處理和抗性篩選,獲得1株色氨酸高產(chǎn)菌株ACTRP104,經(jīng)過30L發(fā)酵罐培養(yǎng)44h后L-色氨酸質(zhì)量濃度可以達到61.65g/L,葡萄糖轉(zhuǎn)化率達到20.64%,比出發(fā)菌分別提高了20.69%和17.81%。結(jié)果表明,ARTP誘變和結(jié)構(gòu)類似物抗性篩選相結(jié)合,可以有效地獲得色氨酸高產(chǎn)突變菌株,大大提高色氨酸的發(fā)酵生產(chǎn)技術(shù)水平,獲得的色氨酸高產(chǎn)菌株ACTRP104具有較好的工業(yè)化應(yīng)用前景。

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